"C666-1:人鼻咽癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

凍存和復蘇的原則：慢凍快融》當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升GAO，并在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶；相反，結晶就大，大結晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。慢凍程序》1.標準程序：采用細胞凍存器》當溫度在-25℃以上時，1~2℃/min；當溫度達-25℃以下時，5~10℃/min；當溫度達-100℃時，可迅速放入液氮中。2.簡易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內，紗布袋系以線繩，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2℃的速度，在40min內降至液氮表面過夜，次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時（或隔夜）→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法：1.預先配制凍存液》（1）8%DMSO+細胞生長液（92%血清）2.取對數生長期細胞，經胰酶消化后，加入適量凍存液，用吸管吹打制成細胞懸液（1×10(6)~5×10(6)細胞/ml）。3.加入1ml細胞于凍存管中，密封后標記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復蘇方法：1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內全部融化（不要超過3分鐘）。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑別敏感解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

MODE-K細胞類似產品：：RC-4B細胞、GM03190A細胞、H-69細胞

MDCC MSB1細胞類似產品：：MLA-144細胞、DoTc2-4510細胞、Porcine Kidney-13細胞

A-427細胞類似產品：：D407細胞、Centre Antoine Lacassagne-62細胞、SL-1細胞

QGY-7701細胞類似產品：：CMT 93細胞、CAL 12T細胞、U20S細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

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細胞形態(tài)：上皮細胞樣

BE2M17細胞類似產品：：LLC-PK-1細胞、KU 19-19細胞、Ketr-3細胞

6-T CEM細胞類似產品：：1.1B4細胞、TR146細胞、Walker256細胞

SK-N-BE(2)-M17細胞類似產品：：MAntle cell VERona-1細胞、Mono-Mac-1細胞、J111細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。研究人員在細胞培養(yǎng)時出現存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C 太久。一些懸浮細胞抱團生長是正?，F象，大部分懸浮細胞在細胞密度很GAO的情況下，很可能會出現部分細胞抱團生長的現象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制HAO細胞密度。如果出現了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細胞團）。部分細胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個是正?，F象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態(tài)；如果大部分細胞出現空泡，且單個細胞內空泡數目偏多，則可能細胞代次較GAO，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

CCD841CoN細胞類似產品：：Molm 14細胞、Hep2細胞、Hs742T細胞

L428細胞類似產品：：Roswell Park Memorial Institute 2650細胞、MCF-7/AdrR細胞、H82細胞

UPCI-SCC-090細胞類似產品：：U20-S細胞、R3/1細胞、OVMANA細胞

Kit-225-K6細胞類似產品：：OVCA-420細胞、H4IIEC3細胞、ABE-8.1/2細胞

EoL-1 cell細胞類似產品：：Hs746-T細胞、NGP細胞、143BTK-細胞

HCC366細胞類似產品：：L-363細胞、KYSE70細胞、GM00637H細胞

SW-48細胞類似產品：：COLO 16細胞、H-2030細胞、B16 F1細胞

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HEK 293A細胞類似產品：：ESC-410細胞、LC-1/sq細胞、RGC5細胞

PANC0203細胞類似產品：：SK-BR3細胞、SNU423細胞、HeLa 229細胞

GOTO細胞類似產品：：MTC-TT細胞、OV 1063細胞、KRC-Y細胞

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C666-1:人鼻咽癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

PC-3/M細胞類似產品：：184A1細胞、NCM356細胞、H1155細胞

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HOP-92細胞類似產品：：L-WRN細胞、SCC25細胞、LA-N-6細胞

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MIHA細胞類似產品：：HCS-2/8細胞、NPC-039細胞、PaTu8988s細胞

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F442-A細胞類似產品：：MOLT-16細胞、DH 82細胞、UCLA-SO-M14細胞

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NCI-H2030細胞類似產品：：TK+/- (clone 3.7.2C)細胞、H-2591細胞、BIU-87/Adr細胞

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Lewis lung carcinoma line 1細胞類似產品：：MDA157細胞、IPEC-1細胞、SNU119細胞

SKBR-3細胞類似產品：：RPMI 1846細胞、NCIH2085細胞、RT-BM-1細胞

CHP-100細胞類似產品：：PC9細胞、CAL-33細胞、HPDE6c7細胞

MOLP-2細胞類似產品：：NCI-H157細胞、H-510A細胞、HCC-2935細胞

MMVECs細胞類似產品：：MFE 280細胞、MOLT16細胞、JIMT1細胞

T HEECs細胞類似產品：：N1E-115細胞、NALM 6細胞、SHG-44細胞

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3T3-J2細胞類似產品：：Potorous tridactylus Kidney 1細胞、C-127細胞、VK2細胞

BC-020細胞類似產品：：C-8161細胞、Vero E6細胞、B-16細胞

H-2291細胞類似產品：：SuDHL 4細胞、BCaP-37細胞、HeLa/DDP細胞

C666-1:人鼻咽癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞類似產品：：AGS細胞、P388.D1細胞、P3X63 AG8-653細胞

GOS-3細胞類似產品：：SW-837細胞、8305C_1細胞、OV-90細胞

CMT 64細胞類似產品：：TGBC11T細胞、M20 [Human melanoma]細胞、NEC8細胞

SF 763細胞類似產品：：GM2131細胞、RD細胞、HT-29細胞

LI7細胞類似產品：：BxPC-3細胞、3T3 J2細胞、T173細胞

NCI-H838細胞類似產品：：hTERT-RPE-1細胞、R1610細胞、Okayama University Medical School-23細胞

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