"P30/OHK Cells(贈送Str鑒定報告)|人急性淋巴白血病細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣

【細胞培養(yǎng)中原蟲的污染情況總結】原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不HAO，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站YOU勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，Zui終形成惡性循環(huán)。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞)，３７度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(酸鏈霉素和芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。１)孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水；２)超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素；３)超凈臺的風機不能過大，風機到６-８格。否則也可能能致霉菌污染；４)無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

細胞生長：懸浮

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P30/OHK Cells(贈送Str鑒定報告)|人急性淋巴白血病細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)過程中，總是會出現各種意想不到的問題，一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法，希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助：1)觀察細胞狀態(tài)：貼壁細胞密度達到85-90%，即可以細胞凍存形式進行保藏，拍照，記錄細胞狀態(tài)；2)細胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當細胞剛開始脫落時，立即轉移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài)，至細胞成流沙狀完全脫落，轉移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細胞離心：將終止消化后的細胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細胞凍存：離心后去除細胞上清液，按照凍存細胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應的凍存管中，進行凍存；6)細胞保藏：凍存管做HAO標記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。

細胞傳代方法：１０^５ cells/６０mm dish

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

P30/OHK Cells(贈送Str鑒定報告)|人急性淋巴白血病細胞

細胞生長特性：懸浮生長

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如何進行細胞復蘇：１)從液氮容器中取出凍存管，直接浸入３７℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化；２)從３７℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加１０倍以上培養(yǎng)液，混勻；３)離心，１０００rpm，５min；４)棄去上清液，加入含１０%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，３７℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；５)次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)?！緶剀疤嵝选浚?從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但ZuiHAO為對數生長期細胞。在凍存前一天ZuiHAO換一次培養(yǎng)液；２)將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做HAO防護工作(戴棉手套)，以免凍傷；３)凍存和復蘇ZuiHAO用新配制的培養(yǎng)液。細胞復蘇的時候，有些初次實驗員將凍存管從液氮中取出后，放在室溫下，經常發(fā)生凍存管爆炸，該怎么避免出現這種情況嗎？其中在擰緊凍存管的時候是否有哪些細節(jié)要注意的？一般常用的方法是取出凍存管后在超凈工作臺中用酒精棉球擦試管口，再稍擰松蓋子，再放３７度水浴鍋中搖溶，在將細胞轉移到裝有３７度預熱過的培養(yǎng)基的試管中，迅速離心，再用培養(yǎng)基洗一遍。

細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶HAO防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)ZuiHAO選擇進口產品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較GAO，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不HAO離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰HAO稀釋到了無害濃度。

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