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Purmorphamine

別名: Shh Signaling Antagonist VI

Purmorphamine (Shh Signaling Antagonist VI)直接結(jié)合并激活Smoothened，阻斷BODIPY-cyclopamine與Smo結(jié)合，在HEK293T細(xì)胞中IC50約為1.5 μM，也誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化，EC50為1μM。Purmorphamine 可減少基礎(chǔ)和誘導(dǎo)的自噬。

Purmorphamine Chemical Structure

Purmorphamine Chemical Structure

CAS: 483367-10-8

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Purmorphamine相關(guān)產(chǎn)品

相關(guān)信號通路圖

Hedgehog/Smoothened Signaling Pathways

Hedgehog/Smoothened信號通路圖

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)示例

細(xì)胞系 實(shí)驗(yàn)類型 給藥濃度 孵育時(shí)間 活性描述 文獻(xiàn)信息
HEK293T Function assay 5 uM 4 hrs Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo N-terminal cysteine domain expressed in HEK293T cells at 5 uM after 4 hrs by fluorescence microscopy 16408088
HEK293T Function assay 5 uM 4 hrs Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo C-terminal cytoplasmic domain expressed in HEK293T cells at 5 uM after 4 hrs by fluorescence microscopy 16408088
Shh Light2 Function assay 30 hrs Activation of Shh in mouse Shh Light2 cells after 30 hrs by luciferase reporter gene assay, EC50 = 1 μM. 16408088
C3H10T1/2 Function assay 6 days Activity at Smo in mouse C3H10T1/2 cells assessed as induction of cell differentiation into osteoblast incubated for 6 days by alkaline phosphatase assay, EC50 = 0.8 μM. 27429255
HEK293T Function assay 1 hr Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo expressed in HEK293T cells after 1 hr by fluorescence microscopy, IC50 = 1.5 μM. 16408088
Shh Light2 Function assay 30 hrs Activation of Shh in mouse Shh Light2 cells assessed as beta-galactosidase activity after 30 hrs by luciferase reporter gene assay in presence of 100 nM 3-keto-N-aminoethyl-N'-aminocaproyldihydrocinnamoyl cyclopamine 16408088
C3H10T1/2 Function assay Induction of osteogenesis in mouse C3H10T1/2 cells assessed as induction of osteoblast specific marker alkaline phosphatase by immunofluorescence method, EC50 = 1 μM. 16408003
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
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生物活性

產(chǎn)品描述 Purmorphamine (Shh Signaling Antagonist VI)直接結(jié)合并激活Smoothened，阻斷BODIPY-cyclopamine與Smo結(jié)合，在HEK293T細(xì)胞中IC50約為1.5 μM，也誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化，EC50為1μM。Purmorphamine 可減少基礎(chǔ)和誘導(dǎo)的自噬。
靶點(diǎn)
Smoothened [1]
(HEK293T cells)
~1.5 μM
體外研究(In Vitro)
體外研究活性

Purmorphamine與Cyclopamine（一種Smo拮抗劑）競爭，直接結(jié)合和激活Smoothened，而激活Hedgehog通路，IC50為1.5 μM。[1]

Purmorphamine作用于全能C3H10T1/2 細(xì)胞，是有效的骨生成誘導(dǎo)劑。Purmorphamine作用于C3H10T1/2細(xì)胞的EC50(根據(jù)ALP表達(dá)) 為1 μM。Purmorphamine (1 μM) 和BMP-4 (100 ng/mL)聯(lián)用，作用于3T3-L1細(xì)胞，使ALP活性增強(qiáng)90多倍。[2]

與BMP-4相比, Purmorphamine作用于多能間充質(zhì)祖細(xì)胞，誘導(dǎo)骨生成，通過激活Hedgehog信號。[3]
激酶實(shí)驗(yàn) 結(jié)合實(shí)驗(yàn)
使用BODIPY-Cyclopamine和過表達(dá)Smo的細(xì)胞進(jìn)行Smo結(jié)合實(shí)驗(yàn)，使用CMV啟動子, 含SV40起點(diǎn)的表達(dá)載體，獲得Smo-Myc3，缺失突變體Smo CRD (68到182位氨基酸缺失), 和Smo CT (556到793位氨基酸缺失)。HEK 293T細(xì)胞在12孔板中的聚-D-賴氨酸處理的玻璃蓋玻片上生長，直到70％匯合，然后使用FuGene 6，通過適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體(每孔0.5g)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染兩天后，HEK 293T細(xì)胞與含0.5％小牛血清，5 nM BODIPY-Cyclopamine，和不同濃度的Purmorphamine (0, 1.5, 或5 M) (每孔1 mL)的 DMEM培養(yǎng)基在37°C下溫育1小時(shí)。然后使用1×PBS緩沖液（每孔1 mL）洗滌過表達(dá)Smo的細(xì)胞，置于含DAPI的培養(yǎng)基，使用Leica DM4500B熒光顯微鏡觀察。使用固定細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合檢測，使用溶于1×PBS緩沖液（每孔1 mL）的3％多聚甲醛在室溫下固定過表達(dá)Smo的HEK293T細(xì)胞10分鐘，然后使用含10mM甘氨酸和0.2％疊氮化鈉的1×PBS緩沖液（每孔1 mL）處理5分鐘，使用1×PBS緩沖液（每孔1 mL）洗滌，然后再使用含Purmorphamine的培養(yǎng)基在室溫下處理4小時(shí)。
細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞系 C3H10T1/2 細(xì)胞
濃度 0.5-10 μM
孵育時(shí)間 4 天
方法

C3H10T1/2細(xì)胞在T175燒瓶中擴(kuò)增，第13通道的細(xì)胞通過胰蛋白酶/EDTA分離，然后在生長培養(yǎng)基中稀釋。使用Multi-dropTM液體傳輸系統(tǒng)，將產(chǎn)生的細(xì)胞懸浮液按每孔2500個(gè)細(xì)胞接種到黑色透明底384孔板中，孔中為100 µL生長培養(yǎng)基。溫育過夜后，細(xì)胞附著到孔的底部。使用Mini TrakTM多位分配系統(tǒng)，將溶于DMSO (500 nL)的每組Purmorphamine儲存液輸送到對應(yīng)孔中，確保Purmorphamine終濃度為5μM。然后細(xì)胞置于37°C下含5% CO2的空氣中溫育。4天后，除去培養(yǎng)基，10 μL被動裂解緩沖液加入到每孔中。5分鐘后，10 μL堿性磷酸酶底物溶液添加到每孔中。在室溫下溫育15分鐘后，在Acquest高通量酶標(biāo)儀上對實(shí)驗(yàn)板進(jìn)行讀數(shù)。
實(shí)驗(yàn)圖片 檢測方法 檢測指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)圖片 PMID
Western blot Patch1 / Gli1 / LC3 / p62 26609469
Immunofluorescence SOX18 26588701
Growth inhibition assay Cell viability 26588701
體內(nèi)研究(In Vivo)
體內(nèi)研究活性

Purmorphamine作用于基于大鼠結(jié)構(gòu)的人間充質(zhì)干細(xì)胞，上調(diào)ALP表達(dá)。[4]

化學(xué)信息&溶解度

分子量 520.62 分子式

C31H32N6O2
CAS號 483367-10-8 SDF Download Purmorphamine SDF
Smiles C1CCC(CC1)N2C=NC3=C(N=C(N=C32)OC4=CC=CC5=CC=CC=C54)NC6=CC=C(C=C6)N7CCOCC7
儲存條件(自收到貨起)

體外溶解度
批次：

DMSO : 4 mg/mL ( (7.68 mM) ；DMSO吸濕會降低化合物溶解度，請使用新開封DMSO)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

摩爾濃度計(jì)算器

體內(nèi)溶解度
批次：

現(xiàn)配現(xiàn)用，請按從左到右的順序依次添加，澄清后再加入下一溶劑

 動物體內(nèi)配方計(jì)算器

實(shí)驗(yàn)計(jì)算

摩爾濃度計(jì)算器

質(zhì)量 濃度 體積 分子量

動物體內(nèi)配方計(jì)算器（澄清溶液）

第一步：請輸入基本實(shí)驗(yàn)信息（考慮到實(shí)驗(yàn)過程中的損耗，建議多配一只動物的藥量）

mg/kg g μL 只

第二步：請輸入動物體內(nèi)配方組成（配方適用于不溶于水的藥物；不同批次藥物配方比例不同，請聯(lián)系Selleck為您提供正確的澄清溶液配方）

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

計(jì)算結(jié)果：

工作液濃度： mg/ml；

DMSO母液配制方法： mg 藥物溶于μL DMSO溶液（母液濃度mg/mL，注：如該濃度超過該批次藥物DMSO溶解度，請先聯(lián)系Selleck）；

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混勻澄清后加入μL Tween 80，混勻澄清后加入μL ddH2O，混勻澄清。

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混勻澄清。

注意：1. 首先保證母液是澄清的；
2.一定要按照順序依次將溶劑加入，進(jìn)行下一步操作之前必須保證上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用渦旋、超聲或水浴加熱等物理方法助溶。

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