Hela細(xì)胞血清饑餓1小時(shí),并用IGF (100ng/mL)或SC79 (4 μg/mL)處理30分鐘。將細(xì)胞在裂解緩沖液中裂解,緩沖液包含250 mM 蔗糖,20 mM HEPES,10 mM KCl,1.5 mM MgCl2,1 mM EDTA,1 mM EGTA,并用蛋白酶抑制劑進(jìn)行增補(bǔ)。細(xì)胞通過(guò)25G針頭幾次,并在冰上保持20分鐘。這時(shí)候取走所有的細(xì)胞裂解物。細(xì)胞裂解物以100,000g離心30分鐘。上層清液以胞質(zhì)組分收集。沉淀用裂解緩沖液洗滌,代表細(xì)胞膜組分??偧?xì)胞裂解物,胞質(zhì)和細(xì)胞膜組分用SDS-PAGE溶解,并通過(guò)免疫印跡分析磷酸-Akt (S473),總Akt,微管蛋白(細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記物)和Orai1 (細(xì)胞膜標(biāo)記物)。