MCE SYBR Green I 是一種可代替溴化乙錠 (EB) 的新型花青類核酸染料，毒性很低，使用安全。SYBR Green I 最低可以檢出 20 pg 的 double-stranded DNA (dsDNA) (254 nm)，靈敏度高于溴化乙錠 (EB) 檢測方法。SYBRGreen I 還可以用于檢測寡核苷酸，靈敏度同樣高于 EB。在采用瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺電泳方法檢測 dsDNA 時，SYBR Green I 是最靈敏的熒光染料之一。SYBRGreen I 與核酸結(jié)合后的最大吸收峰為 490 nm，另外，在紫外區(qū) 290 nm 和 380 nm 處也有吸收峰。在紫外透射光下與核酸結(jié)合后呈綠色熒光，最大發(fā)射波長為 520 nm，可使用可見光凝膠透射系統(tǒng)或紫外凝膠透射系統(tǒng)觀測。SYBR Green I 用于電泳檢測 DNA 時，既可在電泳前進行染色 (預(yù)染染色法)，也可電泳后再進行染色 (后染染色法)

? 靈敏度高：低可以檢出 20 pg 的 dsDNA

? 高信噪比：樣品熒光信號強，背景信號低

? 適用性強：適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色

? 無需去染色或洗滌步驟，與不同檢測設(shè)備兼容

-20°C，1 年

避光保存

預(yù)染染色法

a. 制膠：根據(jù)需要配制適當濃度 (0.8-3.0%) 的瓊脂糖膠液。在瓊脂糖完全融解后，適當冷卻但未凝固時，按照每 100 mL 膠液加入 10 μL SYBRGreen I 的比例 (10,000:1) 加入SYBR Green I。混勻后即可把瓊脂糖膠液倒入制備凝膠的模具中。

b. 樣品、Marker 預(yù)染：將 SYBRGreen I 與 6× Loading Buffer 按照 1:9 的比例混合 (如 5 μL 的染料與 45 μL 的 6× Loading Buffer 混合)，獲得 Loading Buffer 預(yù)染液。將核酸樣品和 Marker 分別與 Loading Buffer 預(yù)染液按 5:1 的比例混合，室溫孵育 3 min 左右。

Note: 含有 SDS 的 Loading Buffer 會影響電泳結(jié)果，建議使用不含 SDS 的 Loading Buffer。由于SYBR Green I 靈敏度高，核酸樣品量較大時可能會使條帶分不清，所以建議品質(zhì)較好的 Marker 和濃度較高的樣品可以適當稀釋后使用 (一般 2 μL 配制好的 Loading Buffer 預(yù)染液對 DNA 的有效承載量為 100-500 ng)。

c. 按常規(guī)方法上樣電泳，電泳結(jié)束后即可在紫外或藍光照射下觀察。

后染染色法

a. 按照常規(guī)方法進行電泳，不需要在制膠時加 SYBR Green I。

b. 用 pH 7.5-8.0 的緩沖液 (例如 TAE、TBE 或 TE)，按照一定比例稀釋 SYBR Green I (瓊脂糖凝膠電泳按 1:10,000 或 2:10,000 的比例稀釋；聚丙烯凝膠電泳按 3:10,000 或 4:10,000 的比例稀釋)，輕輕震蕩混勻，即成染色液。染色液一周內(nèi)，避光低溫儲存應(yīng)至少可用 4 次。

c. 將凝膠完全浸入染色液中，室溫避光震蕩染色 30-60 min。染色時間根據(jù)膠濃度及厚度確定，凝膠越厚或濃度越高，所需的染色時間越長。

d. 染色結(jié)束后即可直接在紫外或藍光照射下觀察。