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  1. 誘導疾病模型產(chǎn)品 Others
  2. 免疫與炎癥疾病模型 Fluorescent Dye
  3. 半抗原
  4. FITC

FITC  (Synonyms: 異硫氰酸熒光素酯; Fluorescein 5-isothiocyanate)

目錄號: HY-66019 純度: 98.60%
COA 產(chǎn)品使用指南 技術支持

FITC,英文全稱 Fluorescein Isothiocyanate,中文名稱異硫氰酸熒光素,是生物學中應用最為廣泛的一種綠色熒光素衍生物。FITC 具有高吸收率和優(yōu)良的熒光量子產(chǎn)率等特點。FITC 的異硫氰酸基團可與蛋白質上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團相結合,從而實現(xiàn)包括抗體,凝集素在內的蛋白標記。FITC 除了用作蛋白質標記物,還可用作蛋白質熒光示蹤劑,通過標記抗體而快速鑒定病原體,或是用于蛋白質和多肽(HPLC)的微量測序。FITC 的最大激發(fā)波長為 494 nm。一旦激發(fā),在最大發(fā)射波長 520 nm 處呈黃-綠色熒光。此外,F(xiàn)ITC 也是一種能誘發(fā)接觸超敏反應 (CHS) 的半抗原,并誘導特應性皮炎模型。

MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學研究或藥證申報,我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務

FITC Chemical Structure

FITC Chemical Structure

CAS No. : 3326-32-7

1.  客戶無需承擔相應的運輸費用。

2.  同一機構(單位)同一產(chǎn)品試用裝僅限申領一次,同一機構(單位)一年內

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MCE 顧客使用本產(chǎn)品發(fā)表的 45 篇科研文獻

IF

    FITC purchased from MCE. Usage Cited in: Adv Sci (Weinh). 2022 Jan 20;e2104344.  [Abstract]

    For detection of localization of WBC100 in cells, FITC labeled WBC100 (WBC100‐FITC) is used. HEK293T cells are transfected with the indicated plasmids for 48 h. Cells are treated with 1 μM WBC100‐FITC or FITC for 24 h.

    FITC purchased from MCE. Usage Cited in: J Nanobiotechnology. 2022 Feb 2;20(1):61.  [Abstract]

    To exam the ability of anti-PD-L1 antibodies (aPD-L1) nanovesicles to binding to tumor cells, B16F10 cells are cultured for 24 h. FITC-labeled aPD-L1 nanovesicles or nanovesicles are incubated with the cancer cells for 3 h.

    FITC purchased from MCE. Usage Cited in: Nat Commun. 2021 Nov 5;12(1):6426.  [Abstract]

    Cinnamate acetate (CIA) is labeled with FITC. Distribution of CIA/FITC in root cells of wild-type, ala7 mutant and complemented Arabidopsis seedlings. The seedlings are treated with CIA/FITC (5?μg/mL) and FM4-64 (8?μM) for 1?h, 2?h, and 8?h.

    FITC purchased from MCE. Usage Cited in: ACS Nano. 2020 Nov 24;14(11):14907-14918.  [Abstract]

    FITC-labeled MnO2/BPD are added at a concentration of 50 μg/mL and incubated for another 4 h to allow the nanoparticles to enter the cells. By conjugating FITC to MnO2/BPD, FL could be monitored at 488 nm, and the vessels could be observed at 660 nm by Evans Blue staining.

    FITC purchased from MCE. Usage Cited in: Chem Eng J. 2020, 127870.

    FITC (1 mg/mL) solution is prepared with dimethyl sulfoxide. Then FITC solution is added dropwise into laccase (5 mg/mL) solution, and the mixed solution is then stirred at 4 °C for 4 h. Laccase is labelled by FITC and exhibited green emissions.
    • 生物活性

    • 實驗參考方法

    • 純度 & 產(chǎn)品資料

    • 參考文獻

    生物活性

    FITC (Fluorescein Isothiocyanate), is one of the green fluorescein derivatives widely used in biology. FITC has the characteristics of high absorptivity and excellent fluorescence quantum yield. The isothiocyanate group of FITC can be combined with amino, sulfhydryl, imidazole, tyrosyl, carbonyl and other groups on the protein, so as to achieve protein labeling including antibodies and lectins. In addition to its use as a protein marker, FITC can also be used as a fluorescent protein tracer to rapidly identify pathogens by labeling antibodies, or for microsequencing of proteins and peptides (HPLC). The maximum excitation wavelength of FITC is 494 nm. Once excited, it fluoresces yellow-green at a maximum emission wavelength of 520 nm. In addition, FITC is also a hapten that can induce contact hypersensitivity (CHS) and induce an atopic dermatitis model[1][2][3][4].

    體外研究
    (In Vitro)

    原液制備

    1. 蛋白準備
    為了獲得最佳標記效果,請將蛋白 (抗體) 濃度配制為 1 mg/mL。
    1) 蛋白溶液PH值應為 8.5±0.5,若 pH 低于 8.0,則用 1 M 碳酸氫鈉進行調整。
    2) 若蛋白濃度低于 1 mg/mL,標記效率會大大降低,為了獲得最佳標記效率,建議最終蛋白質濃度范圍為 1-10 mg/mL。
    3) 蛋白必須在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和銨離子的緩沖液中,否則會影響標記效率。
    2. 染料準備
    將無水二甲基亞砜加入 FITC 小瓶中,制成 10 mM 儲備溶液,震蕩搖勻。
    注:FITC 要現(xiàn)配現(xiàn)用,避光。
    3. 染料用量計算
    標記反應所需的 FITC 用量取決于要標記蛋白的用量,F(xiàn)ITC 與蛋白的最佳質量比為 1:50 左右。
    例:假如所需標記蛋白為 1 mL,2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC,則所需 FITC 體積為 40 μL。
    計算公式:
    Molar F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
    C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
    注:
    C:一種蛋白質常數(shù); MW:蛋白質分子量; 389:FITC 的分子量; 195:FITC 偶聯(lián)物在 pH=13, 490 nm 處的吸光值 E0.1%; (0.35×A495):基于 FITC A280 的校正因子; E0.1%:蛋白(1.0 mg/mL)在 280 nm 處的吸光值。

    使用說明
    1. 標記反應
    1) 取算好體積的新鮮配制的 50 μL FITC 緩慢加入到 1 mL 蛋白樣品溶液中,輕輕搖勻混合,然后短暫離心將樣品收集在反應管底部。切忌劇烈混勻,防止蛋白樣品變性失活。
    2) 將該反應小管置于避光處,在室溫條件下輕輕搖晃孵育 8 h,每隔 30 分鐘,將反應小管輕輕顛倒幾次,以充分混合兩種反應物,提高標記效率。
    3) 加入 5 M 的 NH4Cl 至終濃度 50 mM,4℃ 終止反應 2 h。
    2. 蛋白純化脫鹽
    以下方案以使用 Sephadex G-25 柱純化染料蛋白偶聯(lián)物為例。
    1) 按照生產(chǎn)說明書制備 Sephadex G-25 柱。
    2) 將反應混合物裝入Sephadex G-25 色譜柱頂部。
    3) 當樣品運行到頂部樹脂表面下方時,立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
    4) 向所需樣品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4),完成柱純化。結合物含有所需要的染料-蛋白質綴合物的組分。

    注意事項
    1. FITC 對光及濕度敏感。即用即配 FITC 溶液并丟棄未使用的部分。
    2. 低濃度的疊氮化鈉 (≤3 mM 或 0.02%) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01%) 不會顯著干擾蛋白標記;但是 20-50% 的甘油會降低標記效率。
    3. 避免使用含伯胺 (例如 Tris,甘氨酸) 或銨離子的緩沖液,它們與待標記蛋白競爭反應。
    4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。
    5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

    分子量

    389.38

    Formula

    C21H11NO5S

    CAS 號
    性狀

    固體

    顏色

    Yellow to orange

    Emission (Em)

    525

    Excitation (Ex)

    488

    中文名稱

    異硫氰酸熒光素酯;熒光素-5-異氰酸酯

    運輸條件

    Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

    儲存方式

    -20°C, protect from light, stored under nitrogen

    *In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)

    溶解性數(shù)據(jù)
    細胞實驗: 

    DMSO 中的溶解度 : 62.5 mg/mL (160.51 mM; 超聲助溶; 吸濕的 DMSO 對產(chǎn)品的溶解度有顯著影響,請使用新開封的 DMSO)

    H2O 中的溶解度 : < 0.1 mg/mL (insoluble)

    配制儲備液
    濃度 溶劑體積 質量 1 mg 5 mg 10 mg
    1 mM 2.5682 mL 12.8409 mL 25.6819 mL
    5 mM 0.5136 mL 2.5682 mL 5.1364 mL
    查看完整儲備液配制表

    * 請根據(jù)產(chǎn)品在不同溶劑中的溶解度選擇合適的溶劑配制儲備液;一旦配成溶液,請分裝保存,避免反復凍融造成的產(chǎn)品失效。
    儲備液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C儲存時,請在6個月內使用,-20°C儲存時,請在1個月內使用。

    • 摩爾計算器

    • 稀釋計算器

    Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)

    質量
    =
    濃度
    ×
    體積
    ×
    分子量 *

    Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)

    This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2

    濃度 (start)

    C1

    ×
    體積 (start)

    V1

    =
    濃度 (final)

    C2

    ×
    體積 (final)

    V2

    動物實驗:

    請根據(jù)您的 實驗動物和給藥方式 選擇適當?shù)娜芙夥桨浮?

    以下溶解方案都請先按照 In Vitro 方式配制澄清的儲備液,再依次添加助溶劑:
    ——為保證實驗結果的可靠性,澄清的儲備液可以根據(jù)儲存條件,適當保存;體內實驗的工作液,建議您現(xiàn)用現(xiàn)配,當天使用
    以下溶劑前顯示的百分比是指該溶劑在您配制終溶液中的體積占比;如在配制過程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象,可以通過加熱和/或超聲的方式助溶

    • 方案 一

      請依序添加每種溶劑: 10% DMSO    40% PEG300    5% Tween-80    45% Saline

      Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (5.34 mM); 澄清溶液

      此方案可獲得 ≥ 2.08 mg/mL(飽和度未知)的澄清溶液。

      1 mL 工作液為例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 400 μL PEG300 中,混合均勻;再向上述體系中加入 50 μL Tween-80,混合均勻;然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。

      生理鹽水的配制:將 0.9 g 氯化鈉,溶解于 ddH?O 并定容至 100 mL,可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
    • 方案 二

      請依序添加每種溶劑: 10% DMSO    90% (20% SBE-β-CD in Saline)

      Solubility: 2.08 mg/mL (5.34 mM); 懸濁液; 超聲助溶

      此方案可獲得 2.08 mg/mL的均勻懸濁液,懸濁液可用于口服和腹腔注射。

      1 mL 工作液為例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中,混合均勻。

      2 g SBE-β-CD(磺丁基醚 β-環(huán)糊精)粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中,完全溶解至澄清透明。
    動物溶解方案計算器
    請輸入動物實驗的基本信息:

    給藥劑量

    mg/kg

    動物的平均體重

    g

    每只動物的給藥體積

    μL

    動物數(shù)量

    由于實驗過程有損耗,建議您多配一只動物的量
    請輸入您的動物體內配方組成:
    %
    DMSO +
    +
    %
    Tween-80 +
    %
    Saline
    如果您的動物是免疫缺陷鼠或者體弱鼠,建議 DMSO 中的在最后工作液體系中的占比盡量不超過 2%。
    方案所需 助溶劑 包括:DMSO, ,均可在 MCE 網(wǎng)站選購。 ,Tween 80,均可在 MCE 網(wǎng)站選購。
    計算結果
    工作液所需濃度 : mg/mL
    儲備液配制方法 : mg 藥物溶于 μL  DMSO(母液濃度為 mg/mL)。

    *In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)

    您所需的儲備液濃度超過該產(chǎn)品的實測溶解度,以下方案僅供參考,如有需要,請與 MCE 中國技術支持聯(lián)系。
    動物實驗體內工作液的配制方法 : 取 μL DMSO 儲備液,加入 μL 。 μL ,混合均勻至澄清,再加 μL Tween 80,混合均勻至澄清,再加 μL 生理鹽水
    連續(xù)給藥周期超過半月以上,請謹慎選擇該方案。
    請確保第一步儲備液溶解至澄清狀態(tài),從左到右依次添加助溶劑。您可采用超聲加熱 (超聲清洗儀,建議頻次 20-40 kHz),渦旋吹打等方式輔助溶解。
    純度 & 產(chǎn)品資料

    純度: 98.60%

    染色示例
    參考文獻
    Cell Assay
    [1]

    The frequency of chondrocyte apoptosis is measured by flow cytometry with Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC) and propidium iodide. A total of 1×104 treated chondrocytes are collected from each group, washed in cold PBS and incubated with Annexin V-FITC and PI at room temperature for 15 min in the dark on ice. These samples are then analyzed using a fluorescence-activated cell sorter. Cell Quest software is used to analyze the percentage of apoptosis. All tests are repeated in triplicate.

    MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

    參考文獻

    完整儲備液配制表

    * 請根據(jù)產(chǎn)品在不同溶劑中的溶解度選擇合適的溶劑配制儲備液;一旦配成溶液,請分裝保存,避免反復凍融造成的產(chǎn)品失效。
    儲備液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C儲存時,請在6個月內使用,-20°C儲存時,請在1個月內使用。

    可選溶劑 濃度 溶劑體積 質量 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg
    DMSO 1 mM 2.5682 mL 12.8409 mL 25.6819 mL 64.2046 mL
    5 mM 0.5136 mL 2.5682 mL 5.1364 mL 12.8409 mL
    10 mM 0.2568 mL 1.2841 mL 2.5682 mL 6.4205 mL
    15 mM 0.1712 mL 0.8561 mL 1.7121 mL 4.2803 mL
    20 mM 0.1284 mL 0.6420 mL 1.2841 mL 3.2102 mL
    25 mM 0.1027 mL 0.5136 mL 1.0273 mL 2.5682 mL
    30 mM 0.0856 mL 0.4280 mL 0.8561 mL 2.1402 mL
    40 mM 0.0642 mL 0.3210 mL 0.6420 mL 1.6051 mL
    50 mM 0.0514 mL 0.2568 mL 0.5136 mL 1.2841 mL
    60 mM 0.0428 mL 0.2140 mL 0.4280 mL 1.0701 mL
    80 mM 0.0321 mL 0.1605 mL 0.3210 mL 0.8026 mL
    100 mM 0.0257 mL 0.1284 mL 0.2568 mL 0.6420 mL
    Help & FAQs
    • Do most proteins show cross-species activity?

      Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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    產(chǎn)品名稱:
    FITC
    目錄號:
    HY-66019
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