Hyaluronidase, Bovine testes (Hyaluronate 4-glycanohydrolase; Hyaluronoglucosaminidase) is an endoglycosidase that depolymerizes Hyaluronic acid (HA) (HY-B0633A) by cleavage of glycosidic bonds. Hyaluronidase degrades HA and activates membrane receptors that trigger pathways converging in NF-κB activation. Hyaluronidase is employed in the research of granulomatous foreign body reactions, soft-tissue necrosis caused by vascular compromise and uncomplicated nodules, overcorrection, inflamed nodules or tissue ischemia associated with HA filler injection^{[1][2][3][4][5][6]}.

1. Hyaluronidase 抑制試驗(yàn)^[3]
(1) 將 10 μL 8 mg/mL Hyaluronidase 在緩沖溶液 (0.1 M 乙酸鹽緩沖液, pH 3.6) 中與樣品混合加入試管，并在 37 °C 下孵育 20 分鐘。
(2) 將 20 μL 12.5 mM 氯化鈣加入混合物中，并在 37 °C 下再孵育 20 分鐘。
(3) 用緩沖液中的 50 μL 2.4 μg/mL 透明質(zhì)酸處理活化的 Ca²⁺ 混合物，并在 37 °C 下進(jìn)一步孵育 40 分鐘。
(4) 加入 2 μL 0.4 N 氫氧化鈉和 20 μL 0.4 N 四硼酸鉀四水合物，然后在 100 °C 下水浴孵育 3 分鐘。
(5) 冷卻至室溫后，向混合物中加入 600 μL DMAB 溶液，并在 37 °C 下孵育 20 分鐘。
(6) 使用酶標(biāo)儀在 585 nm 處測(cè)量吸光度。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

1. Hyaluronidase 對(duì) HA 誘導(dǎo)的血管并發(fā)癥中皮膚壞死的影響^[7]
(1) 使用 10 只體重 3-4 kg 的兔子，通過肌肉注射 ketamine (50 mg/kg) 和 xylazine (10 mg/kg) 對(duì)兔子進(jìn)行麻醉。
(2) 剃去耳朵上的毛發(fā)，通過電凝術(shù)凝固耳后的血管后支。用 1% lidocaine (HY-B0185) 浸潤耳朵近端皮膚，并切開皮膚以暴露后耳動(dòng)脈的前支。
(3) 在手術(shù)顯微鏡下用 30 號(hào)針頭穿刺動(dòng)脈，并注射 0.25 mL HA 填充劑。最初注入動(dòng)脈的少量 HA 填充劑可以擴(kuò)張動(dòng)脈腔，有助于針頭在動(dòng)脈內(nèi)的定位。
(4) 將 HA 填充劑注射到雙耳，其中一只耳朵皮下注射 750 IU Hyaluronidase。5 只兔子 (4 h 干預(yù)組) 在 HA 注射后 4 h 注射Hyaluronidase，另外 5 只兔子 (24 h 干預(yù)組) 在 HA 注射 24 h 后注射 Hyaluronidase。
(5) 拍攝皮膚變化的進(jìn)展情況，并測(cè)量最終壞死區(qū)域。使用 Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2. Hyaluronidase 對(duì)基于納米顆粒的抗腫瘤活性的影響^[8]
(1) 本實(shí)驗(yàn)采用雌性 Balb/c 小鼠。將 4T1 細(xì)胞懸浮于 PBS 中，密度為 1×10⁶/50 μL，分別注射于小鼠單側(cè)或雙側(cè)后部皮下。
(2) 當(dāng)腫瘤體積達(dá)到 110-150 mm³ 時(shí)進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將小鼠隨機(jī)分為 4 組 (n=5)：生理鹽水注射組、Hyaluronidase 注射組、NM-Ce6 誘導(dǎo) PDT 組、Hyaluronidase + NM-Ce6 誘導(dǎo) PDT 組。Hyaluronidase 注射組：將 1500 U Hyaluronidase 溶于 50 μL PBS 中，注射至每個(gè)腫瘤內(nèi)。注射 Hyaluronidase 1 小時(shí)后，每只小鼠靜脈注射 200 μL NM-Ce6，Ce6 濃度為 1 mg/mL (Ce6 劑量=10 mg/kg)。注射 NM-Ce6 24 小時(shí)后，以 2 mW/cm² 的功率密度，將腫瘤暴露于 660 nm 光中 60 分鐘，進(jìn)行 PDT。
(3) 在初次治療后的第 6 天再次重復(fù)相同的程序。記錄腫瘤體積和小鼠體重，持續(xù) 12 天。治療后，取出每組 4 個(gè)腫瘤并稱重，取出每組的主要器官進(jìn)行 H&E 染色。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

55000 (average)

37326-33-3

固體

Off-white to light yellow

玻璃酸酶； 透明質(zhì)酸酶

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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