背景及概述[1]
極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物是一種極超敏的以luminol為基礎的ECL化學發(fā)光試劑盒,發(fā)光效果顯著優(yōu)于特超敏ECL化學發(fā)光即用型底物,可與二抗上耦連的辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)發(fā)生化學反應,發(fā)出螢光,從而可以通過用X光片壓片或其它適當螢光成像設備檢測樣品。極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的發(fā)光強度高。
20微升25pg/μl辣根過氧化物酶標記IgG中,加入100微升聯(lián)邁生物的極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物工作液等三種不同的發(fā)光液后,在不同時間點通過化學發(fā)光儀(luminometer)檢測化學發(fā)光。檢測數(shù)據(jù)顯示在1小時內(nèi)極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的發(fā)光效果總是最強的,特超敏ECL化學發(fā)光試劑盒和持久性化學發(fā)光底物的發(fā)光比較穩(wěn)定,但發(fā)光強度要弱不少。
極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的高靈敏度可以大大節(jié)省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量。同時必須注意適當減少一抗和二抗或樣品的用量,以免獲得過深的難以比較灰度的條帶。極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物非常穩(wěn)定。37℃水浴孵育30天,和4℃保存的試劑相比,對相同樣品的檢測效果無任何明顯差異。極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的背景很低,對PVDF膜和硝酸纖維素膜均適用。
注意事項[2]
極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭,A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效,影響后續(xù)的使用效果。各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。特別是B液,含有氧化劑,比較容易被還原而失效。極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的螢光持續(xù)時間很長,但開始反應后的20-30分鐘內(nèi)螢光更強一些,隨后螢光會逐漸減弱,因此請注意充分利用這螢光較強的30分鐘進行壓片或成像。
當發(fā)現(xiàn)極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物的檢測靈敏度過高而影響檢測效果時,可以選擇檢測靈敏度較低一些的其他底物,或者減少樣品、一抗或二抗的用量。極超敏ECL化學發(fā)光即用型底物A液和B液均對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
主要參考資料
[1] 極超敏ECL化學發(fā)光試劑盒說明書