背景[1-3]
SUPER TUBE狗腎細胞是從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細胞株MDCK(ATCCCCL-34)，從中克隆建立了狗上皮樣細胞株SuperTube。當維持高細胞濃度時，Supertube形成大量的小管(據(jù)報道，24孔板的每孔鋪7x105細胞，３天內就能形成小管)。要形成小管，細胞需要每天兩次換液以提供足夠養(yǎng)分。與原始細胞株相比，SuperTube的c-AMP的檢測水平低得多，在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比SuperDome(ATCCCRL-2286)和MDCK都低。
培養(yǎng)液成分：
體外細胞培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質與體內基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素等。將細胞所需的上述物質按其種類和所需數(shù)量嚴格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基。由于動物細胞生活的內環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動物血清以提供一個類似生物體內的環(huán)境，因此在使用合成培養(yǎng)基時，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。
培養(yǎng)條件：
無菌、無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理，通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產物防止細胞代謝產物累積對細胞自身產生危害。營養(yǎng)物質：無機物（無機鹽、微量元素等），有機物（糖、氨基酸、促生長因子等）；血清和血漿(提供細胞生長必須的營養(yǎng)成份)；溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）；氣體環(huán)境（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）；其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定。
應用[4][5]
用于狗腎細胞培養(yǎng)條件優(yōu)化研究
探討狗腎細胞培養(yǎng)影響因素,優(yōu)化狗腎細胞培養(yǎng)條件。
方法：將狗腎細胞以1×104的密度接種到96孔板上,改變狗腎細胞的培養(yǎng)條件:不同的溫度（35℃、36℃、37℃）、不同的培養(yǎng)基（MEM、DMEM、1640）、不同p H值（p H=6.4、6.7、7.0、7.2、7.5）、不同濃度的牛血清（0%、2.5%、5%、10%、15%）、不同濃度的L-谷氨酰胺（0、1、2、4 mmol/L）、不同濃度的4-羥乙基哌嗪乙磺酸（0、50、100、150 mmol/L）、不同濃度的CO2（0%、5%）,每日觀察細胞形態(tài)變化,并在24、48、72、96、120、144 h加入CCK-8測450 mm下的OD值,用OD值的倍數(shù)繪制MDCK細胞的增長曲線,比較不同生長條件對MDCK細胞增殖的影響。
結果：狗腎細胞的培養(yǎng)條件為:37℃、5%濃度的CO2、DMEM培養(yǎng)基、p H值6.77.2、5%10%胎牛血清、4 mmol/L-谷氨酰胺、50100 mmol/L的4-羥乙基哌嗪乙磺酸。結論可以根據(jù)工作需要,調節(jié)牛血清濃度和溫度高低,來加速或減慢MDCK細胞的增殖速度。
參考文獻
[1] Plaque assay and primary isolation of influenza a viruses in an established line of canine kidney cells(MDCK)in the presence of trypsin[J].K.Tobita,A.Sugiura,C.Enomoto,M.Furuyama.Medical Microbiology and Immunology.1975(1)
[2] Plaque assay and primary isolation of influenza a viruses in an established line of canine kidney cells(MDCK)in the presence of trypsin[J].K.Tobita,A.Sugiura,C.Enomoto,M.Furuyama.Medical Microbiology and Immunology.1975(1)
[3] Evaluation of R-Mix FreshCells in shell vials for detection of respiratory viruses.CK Fong,MK Lee,BP Griffith.Journal of Clinical Microbiology.2000
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[5]馬萍,夢瑤,李欣玥,胡侃.狗腎細胞培養(yǎng)條件優(yōu)化[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2017,44(18):3379-3384.