231細(xì)胞概述^[1]

231細(xì)胞來(lái)自患有轉(zhuǎn)移乳腺腺癌的51歲女病人的胸水。 在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III級(jí)）。 細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。

培養(yǎng)條件^[1] 

37℃，100% 空氣，無(wú)菌恒溫培養(yǎng)。231 細(xì)胞增殖能力取決于培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請(qǐng)按照正確的培養(yǎng)方法來(lái)復(fù)蘇、 傳代、凍存，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力，方便后繼研究順利進(jìn)行。

細(xì)胞傳代^[1] 

1. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 90%以上時(shí)，給細(xì)胞傳代；

2. 37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3. 在超凈臺(tái)中，棄培養(yǎng)基，加入 2-5mlPBS 清洗細(xì)胞后，再加入 1ml 胰酶消化細(xì)胞；

4. 顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開(kāi)始脫離瓶壁時(shí)，加入 5ml 培養(yǎng)基終止消化；

5. 用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

6. 將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm 離心 5min；

7. 棄上清，加入 5ml 的培養(yǎng)基（含 10% FBS）重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入沒(méi)有透氣孔的 T25 瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在 25-50%之 間），細(xì)胞密度在 1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶）， 混勻細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布； 8. 將培養(yǎng)瓶瓶蓋擰緊后置于 37°C 的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存方法^[1] 

1. 37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

2. 消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù)：

1>. 洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)；

2>. 充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取 20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；

3>.顯微鏡下，數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)，無(wú)活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色；

4>.細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2； 這里 10000 是不變的，因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為 1mm×1mm×0.1mm 即 10-4cm3 計(jì)數(shù)池內(nèi)，1cm3=1ml，將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū) 的細(xì)胞數(shù)除以 4 取平均數(shù)，乘 2 是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。

5>.細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

注:細(xì)胞密度高時(shí)，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例，計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

3. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在 90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞。

4. 在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm 離心 5min。

5. 棄上清，用 70%培養(yǎng)液+20% FBS+10%DMSO 的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為 1-3×106/ml。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 林宇，岳麗玲，蔣麗艷；巖大戟內(nèi)酯B對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響?！吨袊?guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志》