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液相色譜

液相色譜是目前物質組分微量分析的重要方法之一。色譜分析中兩相是指具有大比表面積的固定相和攜帶有待分離的混合物流過固定相的流動相。用液體作流動相的稱液相色譜。
液相色譜又稱“液相層析”。一種色層分析方法，所用流動相為液體。由于層析柱內液體比氣體受的阻力大，故為了提高分析速度，通常采用高壓輸液方式，所以又稱為“高壓液相色譜”。根據固定相的不同可分為液—固色譜和液—液色譜；根據固定相與流動相所發(fā)生平衡的類型不同，可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜等。用于有機物，無機物和高分子液體的分離及分析。
【簡史】
俄國植物學家茨維特(M.S.Tswett)于1906年首次使用柱層析進行了植物色素的分離，是液相色譜法中最古老的一種，近30年來發(fā)展成各種各樣的色譜分離法，并成為分析化學的一個重要部分。①經典液相色譜法：流動相由柱管上端靠自身重力向下流動，在柱下部出口處逐份收集流出液，再用其他方法進行測定，分析速度慢、效率低；②薄層色譜法：出現于40年代前后，操作方便，分析速度上有了改進，但重復性差、定量困難；③高效液相色譜法：60年代初吉迪丁斯(J.C.Gidelings)將氣相色譜理論經修正后用于液相色譜，為其現代化奠定了基礎。此后在技術上采用了高壓泵，高效固定相和高靈敏度檢測器，發(fā)展為分析速度快、分離效率高和操作自動化的高效液相色譜。1971年亨利(R.A.Henry)等首先把它用于農藥分析。
【高效液相色譜法】
高效液相色譜法是現代分析化學中最重要的分離方法之一。它起源于經典的液相色譜法，其基本方法是將具一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶液作為流動相，用泵將流動相注入裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數據處理裝置記錄色譜圖或進行數據處理，得到測定結果。由于應用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點。
高效液相色譜法適用于能在特定填充劑的色譜柱上進行分離的藥品的分析測定，特別是多組分藥品的測定、雜質檢查和大分子物質的測定。有的藥品需在色譜分離前或后經過衍生化反應方能進行分離或檢測。常用的色譜柱填充劑有：硅膠，用于正相色譜；化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同可用于反相或正相色譜；離子交換填料，用于離子交換色譜；具一定孔徑的大孔填料，用于排阻色譜。
高效液相色譜儀基本由泵、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜數據處理系統(tǒng)組成。檢測器最常用的為可變波長紫外、可見光檢測器，其他檢測器如示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器等。色譜信息的收集和處理常用積分儀或數據工作站進行。梯度洗脫，可用兩臺泵或單臺泵加比例閥進行程控實現。

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HPLC標記試劑

4-氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑熒光胺二茂鐵基乙酸4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑[用于高效液相色譜標記]7-氟苯呋咱-4-硫氨N-(9-吖啶基)馬來酰亞胺[用于高效液相色譜標記]4-硝基-7-哌嗪苯并氧雜噁二唑2,4-二苯基-2-甲氧基-3(2H)-呋喃酮[用于高效液相色譜標記]6-異硫氰酸熒光素9-溴甲基丫啶2,3-二氫-6-異硫氰酸基-1,4-酞嗪二酮[用于化學發(fā)光物的高效液相色譜標記試劑]對硝基苯?；? N,N-二異丙基脲硝基氨基吡咯烷苯并惡嗪N-(4-硝基苯基乙酰氧基)琥珀酰亞銨[用于高效液相色譜標記]3-Methyluric acid-13C4,15N35-氨基熒光素R-(-)-4-硝基-7-(3-氨基吡咯啉)2,1,3-苯并唑4-(N-肼羰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑[用于高效液相色譜標記]

HPLC用溶劑

2-甲基丁烷(異戊烷)乙二醇二甲醚石油醚DME去離子水洋橄欖葉素碳酸丙烯酯

HPLC用離子對試劑

N/A乙酸二丙基銨(約0.5MOL/L的水溶液)[用于液相色譜-質譜的離子對試劑]

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