人胰腺癌細(xì)胞性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
1）收到細(xì)胞后，活細(xì)胞首先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否漏液，培養(yǎng)基是否渾濁；凍存細(xì)胞是否干冰已揮發(fā)完，凍存管蓋是否脫落，破碎，若有這類情況，請(qǐng)務(wù)必拍照記錄，并于收貨24h內(nèi)與我們聯(lián)系。
2）細(xì)胞處理：復(fù)蘇的細(xì)胞：如果是T-25培養(yǎng)瓶活細(xì)胞，收到后請(qǐng)用75%的酒精對(duì)培養(yǎng)瓶表面進(jìn)行消毒處理，然后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱中靜置2~3h后再進(jìn)行后續(xù)處理。
1、細(xì)胞復(fù)蘇
1）配制完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+胎牛血清+雙抗（特殊培養(yǎng)基特殊配置）；
2）細(xì)胞復(fù)蘇：取5ml完全培養(yǎng)基于15ml離心管中，37℃水浴鍋預(yù)熱，從液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出凍存的細(xì)胞，放入37℃水浴鍋中，搖晃使快速化凍（1min左右），然后將化凍的細(xì)胞和預(yù)熱的培養(yǎng)基，移入超凈工作臺(tái)中，化凍的細(xì)胞加入到含預(yù)熱培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）吸棄上清，得到細(xì)胞沉淀，用2ml完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，加入到T25培養(yǎng)瓶中，做好標(biāo)記，放入37℃，5%CO2飽和適度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)皿復(fù)蘇效果更好）；
4）24h后，觀察細(xì)胞貼壁情況（未貼壁的即為死細(xì)胞--針對(duì)貼壁細(xì)胞），吸棄舊培養(yǎng)基，加入新鮮的預(yù)熱（室溫或37℃）的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
2、細(xì)胞傳代
1）待細(xì)胞生長(zhǎng)到80%-90%匯合度時(shí)，吸棄舊的培養(yǎng)基，加入1ml無(wú)菌PBS潤(rùn)洗一次，以去除殘余的培養(yǎng)基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培養(yǎng)箱中消化（1~2min左右，不同細(xì)胞消化時(shí)間不同），取出細(xì)胞，鏡下觀察細(xì)胞至細(xì)胞皺縮變圓；
2）加入1ml完全培養(yǎng)基（含F(xiàn)BS）終止消化，輕輕拍打，使細(xì)胞脫落下來(lái)成單個(gè)細(xì)胞懸液，收集細(xì)胞于15ml無(wú)菌離心管中，1000rpm，離心5min；
3）收集細(xì)胞沉淀，完全培養(yǎng)基重懸，一分為二（可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度調(diào)整比例），分別加入到2個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，做好標(biāo)記，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3、細(xì)胞凍存
1）按照細(xì)胞傳代方法，在超凈工作臺(tái)內(nèi)消化收集細(xì)胞沉淀，取少量細(xì)胞用于計(jì)數(shù)；
2）用預(yù)冷的1ml凍存液（90%完全培養(yǎng)基+10%DMSO）或者無(wú)血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，加入到1.2ml凍存管中，密度為1*106個(gè)/ml。
3）放入程序凍存盒，-80℃過夜后，轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
人胰腺癌細(xì)胞
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