217305-49-2
中文名稱
1, 6-二磷酸果糖鈉
英文名稱
FLUORESCEIN DIPHOSPHATE, TETRAAMMONIUM SALT
CAS
217305-49-2
分子式
C20H17NO11P2
分子量
509.3
MOL 文件
217305-49-2.mol
217305-49-2 結(jié)構(gòu)式
基本信息
中文別名
熒光素二磷酸四銨鹽熒光素二磷酸酯四銨鹽
1, 6-二磷酸果糖鈉
FDP [熒光素二磷酸酯四銨鹽]
英文別名
FDPOTOR
MIAL
Esafofina
Otoraplin (OTOR) human
FDP, TETRAAMMONIUM SALT
Fibrocyte-derived protein
fructosc diphosphate sodium
Fluorescein (tetraammonium)
Fluorescein diphosphate (tetraammonium)
物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀1，6-二磷酸果糖鈉為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，易流動，極易吸濕。易溶于水，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。微香，味微咸，干燥品在室溫下穩(wěn)定。
1，6-二磷酸果糖是存在于人機(jī)體內(nèi)葡萄糖代謝過程中的重要中間產(chǎn)物，是分子水平上的代謝調(diào)節(jié)劑。它的三鈉鹽即本品能通過調(diào)節(jié)葡萄糖代謝中若干酶的活性，提高細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷和磷酸肌酸的濃度，促進(jìn)鉀離子內(nèi)流，增加紅細(xì)胞內(nèi)二磷酸甘油酸的含量，抑制氧自由基和組織胺的釋放，能夠減輕組織因缺血、缺氧造成的組織損害，尤其是對缺血心肌顯示出良好的保護(hù)作用。靜脈注射，血漿中半衰期為10-15min。它自血液分布到血循環(huán)以外的組織，經(jīng)磷酸酶水解成磷酸與果糖，極少部分自尿排出。
1，6-二磷酸果糖是存在于人機(jī)體內(nèi)葡萄糖代謝過程中的重要中間產(chǎn)物，是分子水平上的代謝調(diào)節(jié)劑。它的三鈉鹽即本品能通過調(diào)節(jié)葡萄糖代謝中若干酶的活性，提高細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷和磷酸肌酸的濃度，促進(jìn)鉀離子內(nèi)流，增加紅細(xì)胞內(nèi)二磷酸甘油酸的含量，抑制氧自由基和組織胺的釋放，能夠減輕組織因缺血、缺氧造成的組織損害，尤其是對缺血心肌顯示出良好的保護(hù)作用。靜脈注射，血漿中半衰期為10-15min。它自血液分布到血循環(huán)以外的組織，經(jīng)磷酸酶水解成磷酸與果糖，極少部分自尿排出。
儲存條件-20°C
形態(tài)lyophilized
制備方法
方法1
方法一、酶轉(zhuǎn)化法酶液制備 取經(jīng)多代發(fā)酵應(yīng)用過的酵母渣；懸浮與適量的蒸餾水中，-20℃反復(fù)凍融3次即得酶液。
酵母渣(含F(xiàn)DP合成酶)[-20℃]→酶液
轉(zhuǎn)化、除雜蛋白 上述酶液中加入底物(8%得蔗糖，4%NaH2PO4，0.29%MgCl2，pH6.5)于30℃反應(yīng)6h，再煮沸5min，離心除去雜蛋白即得轉(zhuǎn)化清液。
酶液[底物]→[30℃, 6h]轉(zhuǎn)化液[煮沸]→[30min]轉(zhuǎn)化清液
吸附、洗脫 轉(zhuǎn)化清液通過DEAE-C陰離子交換柱層析，用蒸餾水洗滌至pH7.0，然后進(jìn)行分離洗脫，收集洗脫液加入CaCl2生成其鈣鹽沉淀，過濾，得FDP鈣鹽。
轉(zhuǎn)化清液[DEAE-C交換柱，水]→[pH7.0]洗脫液[CaCl2]→FDP鈣鹽
轉(zhuǎn)化、成鈉鹽 FDP鈣鹽懸浮于水中，用732[H+]樹脂將其轉(zhuǎn)成 FDPH4，用2mol/L NaOH調(diào)pH至5.3-5.8成FDPNa3粗品。通過超濾、除菌、去熱原、凍干即得FDPNa3精品。
FDP鈣鹽[732[H+]樹脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3粗品[過濾]→[除菌，支熱原]超濾液→[凍干]FDPNa3精品
方法二、固定化細(xì)胞制備法
FDP產(chǎn)生菌的培養(yǎng) 啤酒酵母接種于麥芽汁斜面培養(yǎng)基上26℃培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，轉(zhuǎn)種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28℃發(fā)酵培養(yǎng)24h，靜置一周，離心，收集菌體。
FDP產(chǎn)生菌種子[培養(yǎng)基]→[26℃, 24h]FDP產(chǎn)生菌體
固定化細(xì)胞的制備 取活化菌體用等體積生理鹽水懸浮，預(yù)熱至40℃，另用4倍量的生理鹽水加熱溶解卡拉膠(卡拉膠用量為3.2g/L)，兩者于45℃混合攪拌10min，倒入成型器皿中，4-10℃冷卻30min，加入等量的22.2g/L KCl液浸泡硬化4h，切成3mm×3mm×3mm小塊即成。
FDP產(chǎn)生菌體[卡拉膠，KCl]→[4h]固定化細(xì)胞
固定化細(xì)胞的活化 用含底物的表面活性劑，于35℃浸泡活化固定化細(xì)胞24h，以0.3mol/L KCl液洗滌后浸泡生理鹽水中備用。
固定化細(xì)胞[0.3mol/L KCl, NaCl]→[35℃, 24h]活化固定化細(xì)胞
轉(zhuǎn)化、除雜蛋白 用活化固定化細(xì)胞充填柱反應(yīng)器，以上行法，通入30℃底物溶液(內(nèi)含8%蔗糖，4%NaH2PO4，0.3%ATP，0.29%MgCl2)收集轉(zhuǎn)化液，除去雜蛋白得轉(zhuǎn)化清液。
活化固定化細(xì)胞[底物]→[30℃]轉(zhuǎn)化液[除雜蛋白]→轉(zhuǎn)化清液
吸附、洗脫、成鈣鹽 將轉(zhuǎn)化清液通過已處理好的DEAE-C陰離子交換柱，洗滌，再洗脫，收集洗脫液加入適量的CaCl2，生成FDP鈣鹽沉淀。
轉(zhuǎn)化清液[DEAE-C柱]→洗脫液[CaCl2]→FDP鈣鹽
轉(zhuǎn)酸、成鈉鹽 取FDP鈣鹽懸浮于無菌水中，用732[H+]樹脂將其轉(zhuǎn)成FDPH4，用2mol/L NaOH調(diào)pH至5.3-5.8成鈉鹽，活性炭脫色，超濾，凍干，得FDPNa3精品。
FDP鈣鹽[732[H+]樹脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3[超濾]→超濾液[凍干]→FDPNa3精品。